三联玻璃发酵罐是一种由三个相同规格的全玻璃生物反应器组成的平行发酵系统,常用于微生物培养、菌种筛选及工艺优化等实验室研究。其透明罐体便于实时观察发酵状态,具备pH、溶氧(DO)、温度、转速等参数的独立控制功能。为确保无菌操作、数据可比性及设备安全,必须遵循规范的操作流程。以下是
三联玻璃发酵罐的正确使用方法:

1、使用前清洗与灭菌:所有玻璃罐体、搅拌桨、电极及管路需用碱液或专用清洗剂刷洗,再用去离子水冲洗干净。装配后整体进行高压蒸汽灭菌(121℃,30分钟),或采用在位灭菌(SIP)程序。灭菌后通无菌空气维持正压,防止污染。
2、合理安装传感器:pH和溶氧电极应在灭菌前装入,避免高温干烧损坏。安装时确保密封圈完好,接口拧紧但不过力,防止玻璃罐破裂。灭菌后校准电极:pH用标准缓冲液(4.01、7.00)两点校准,溶氧在空气饱和培养基中设为100%。
3、接种与无菌操作:通过火焰圈或无菌接头将种子液接入罐内,全程保持罐内正压。避免频繁开盖,所有补料、取样均通过无菌过滤器或隔膜阀进行,防止杂菌侵入。
4、参数设置与监控:根据菌种需求设定温度(通常30–37℃)、搅拌转速(200–800rpm)、通气量(0.5–2vvm)及pH控制范围。三联罐应设置相同初始条件以保证平行性,但允许个别调整以比较不同工艺效果。
5、防止泡沫溢出:高密度培养易产生泡沫,可手动或自动添加消泡剂(如聚醚类)。消泡探头应正确安装于液面上方,灵敏度适中,避免频繁误触发。
6、运行中观察与记录:定期查看罐内浊度、颜色及气泡状态;同步记录各罐的pH、DO、温度曲线,发现异常(如溶氧骤升可能提示染菌)及时处理。
7、结束后的清洁与保养:发酵结束后立即排空废液,用清水冲洗罐体,再用稀酸或酶清洗剂去除残留蛋白。玻璃部件轻拿轻放,电极按说明书保存(如pH电极存于3MKCl溶液中)。